Культуры клеток микроорганизмов.

Перечень сокращений

АБП – бактерицидный продукт

ДДМ – диско-диффузный способ

ДМСО – диметилсульфоксид

КОЕ – колониеобразующие единицы

МПК – малая подавляющая концентрация

BHI – Brain-heart infusion (сердечно-мозговой экстракт)

MHA – Mueller hinton agar (агар Мюллера-Хинтона)

Vкон – конечный объем


Введение

Определение чувствительности микробов - возбудителей заразных болезней у человека - ­к бактерицидным продуктам (АБП) приобретает все более принципиальное значение в связи с возникновением и широким распространением Культуры клеток микроорганизмов. антибиотико-резистентности у микробов. Стандартным способом определения чувствительности микробов к АБП является диско-диффузионный способ (ДДМ), который был разработан во 2-ой половине 60-х ­ начале 70-х годов XX века.

Диффузионные способы определения чувствительности основаны на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и угнетении роста исследуемой культуры в той Культуры клеток микроорганизмов. зоне, где концентрация АБП превосходит наименьшую подавляющую концентрацию (МПК). МПК ­ малая концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого мельчайшего организма в бульонной культуре либо на плотной питательной среде [Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents, 1998].

Исследования чувствительности микробов к АБП позволяют решить последующие задачки:

- обоснование Культуры клеток микроорганизмов. целенаправленной персональной бактерицидной терапии для исцеления определенной заразной заболевания отдельным клиентам [Leekha et al., 2011];

- воплощение наблюдения за распространением антибиотико-резистентности в отдельных учреждениях либо географических регионах [Сидоренко, 2002];

- исследование новых хим соединений на наличие бактерицидной активности [Голубев и др.,2010].

В данной работе при помощи ДДМ инспектировали наличие бактерицидной активности Культуры клеток микроорганизмов. у 10 в первый раз синтезированных веществ. В качестве мишеней для веществ использовали два вида микробов: Staphilococcus aureus ATCC 25923 и Pseudomonas aerugenosa 103.

Материалы и способы исследования

В опытах использовали:

Диски с антибиотиками для определения чувствительности к ним микробов (ФГУН НИИ ЭМ им. Пастера):

Расширенный набор дисков для оценки антибиотико-чувствительности синегнойной палочки и ацинетобактеров Культуры клеток микроорганизмов. (набор №11), 11 лекарств;

Расширенный набор дисков для оценки антибиотико-чувствительности стафилококков (набор №14), 14 лекарств;

Диски без лекарств (пустые).

Реактивы: агар Мюллера-Хинтона (MHA среда, HiMedia), сердечно-мозговой экстракт (BHI среда, Becton Dickinson), фосфатно-солевой буфер (Sigma, США, таблетированная форма, pH7,4, ).

Фосфатно-солевой буфер (Sigma, США),. Готовили из расчета 1 пилюля Культуры клеток микроорганизмов. фосфатного буфера () на 200 мл дистиллированной воды.

Для изготовления жестких питательных сред использовали агар Мюллера-Хинтона (MHA среда,HiMedia). Среда подготавливалась в согласовании с инструкциями изготовителя из расчета 37 г на 1000 мл дистиллированной воды.

Сердечно-мозговой экстракт (BHI среда, Becton Dickinson) готовили из расчета 27 г на 1000 мл дистиллированной воды. Среда употребляется Культуры клеток микроорганизмов. в качестве питательного бульона для выкармливания ночной бактериальной культуры.

Все среды автоклавировали в течение часа (при давлении 1,2-1,3 мПА). MHA среду после автоклавирования охлаждали до 45-50С°, разливали по чашечкам Петри высотой 3-4 мм и оставляли для застывания.

Культуры клеток микробов.

В работе использовали клинический изолят штамма ATCC 25923 Staphylococcus aureus (SA ATCC 25923) и штамма Культуры клеток микроорганизмов. 103 Pseudomonas aeruginosa (PA 103) из коллекции микробов ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития Рф.

S. aureus и P. aeruginosa инкубировали в течение 12 ч при 37°C в питательном бульоне Brain Heart Infusion («Difco», США), разводили в фосфатно-солевом буфере до заслуги оптической плотности (D625), равной 1 - это т.н Культуры клеток микроорганизмов.. эталон мутности 0,5 по Мак-Фарланду [Семина и др.,2004],что соответствует концентрации 1,5 ×108 КОЕ/мл.

Диско-диффузионный способ.

Активность АБП в ДДМ инспектируют на микробах, за ранее выращенных на жестких питательных средах. На поверхность агара в чашечке Петри наносят бактериальную суспензию в концентрации 1,5 ×108 КОЕ/мл и потом помещают диски, содержащие определенное Культуры клеток микроорганизмов. количество антибиотика. На одну чашечку Петри поперечником 90 мм можно нанести менее 6 дисков на расстоянии 2 см друг от друга. Диффузия антибиотика с дисков в агар приводит к формированию зоны угнетения роста микробов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 37°С в течение ночи учитывают итог методом измерения поперечника Культуры клеток микроорганизмов. зоны вокруг диска в миллиметрах, что позволяет оценить степень бактерицидной активности вещества.

Схематично ДДМ представлен на рисунках 1 и 2.


Рис.1. Схема диско-диффузного способа (ДДМ)

Рис.2. Варианты поперечников зон угнетения роста микробов


kultura-priroda-chelovek-problemi-i-puti-ih-resheniya-sochinenie.html
kultura-rannego-srednevekovya.html
kultura-rechi-aktualnaya-problema-obshestva.html